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一些常見的限定化學成分培養(yǎng)基操作介紹

更新時間:2020-11-10  |  點擊率:749
   限定化學成分培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中的素有成分都是明確的,它同樣不含有動物蛋白,化學限定培養(yǎng)基同樣也不是添加了植物水解物,而是使用了一些已知結構與功能的小分子化合物,如短肽、植物激素等.這種培養(yǎng)基更有利于分析細胞的分泌產物.目前已經有適合于293細胞、CHO細胞、雜交瘤細胞生長的CDM問世。
  一、常規(guī)培養(yǎng)和傳代
  1)在聚碳酸酯Erlenmeyer搖瓶中預平衡足量化學限定培養(yǎng)基1小時。
  2)確定活細胞密度。
  3)調整搖瓶工作體積(見英文說明書表2)。
  4)接種細胞密度為3×105細胞/ml
  5)5%CO2,37℃培養(yǎng)。
  6)細胞密度達到15-40×105細胞/ml時,進行傳代。通常間隔為3-4天。
  7)如果細胞密度太低,或細胞在適應期不生長,則在4天后進行離心,更換培養(yǎng)基。
  對某些細胞系,無須預平衡,而2-8℃的培養(yǎng)液效果更好。
  二、從血清到無血清培養(yǎng)的過渡
  1.離心足量細胞,細胞懸液密度為4-6×105細胞/mL,115×g,5分鐘
  2.細胞在含2%胎牛血清的培養(yǎng)基中重懸培養(yǎng)(必要時含6-8mM谷氨酰胺)。
  3.細胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
  4.在傳代至少3次后降低血清濃度為0.5%。
  5.細胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
  6.在2-4代后血清濃度降為0%
  7.繼續(xù)培養(yǎng)直到細胞存活率>90%
  8.適應后的細胞應在化學限定培養(yǎng)基中以2-5×105細胞/ml接種。培養(yǎng)的細胞應在每3-4天稀釋一次。由于HEK細胞容易積聚,培養(yǎng)物應攪動或搖晃,采用轉瓶或搖瓶系統。